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miRNA RT qPCR檢測

發布時間:2021/09/24
miRNA RT qPCR檢測

  實驗介紹MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中發現的一類內源性的具有調控功能的非編碼RNA,其大小長約20~25個核苷酸。成熟的miRNAs是由較長的初級轉錄物經過一系列核酸酶的剪切加工而產生的,隨后組裝進RNA誘導的沉默復合體(RNA-induced silencing complex,RISC),通過堿基互補配對的方式識別靶mRNA,并根據互補程度的不同指導沉默復合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。最近的研究表明miRNA參與各種各樣的調節途徑,包括發育、病毒防御、造血過程、器官形成、細胞增殖和凋亡、脂肪代謝等等。它的表達量分析是生物功能研究的基礎,細胞、組織或血液中miRNA表達譜的檢測,可協助研究信號通路相關miRNA及其靶基因miRNA表達定量分析是生物功能研究的基礎。細胞、組織或血液中的miRNA表達譜的檢測,可協助研究信號通路相關miRNA及其靶基因。

 

  交付結果:實驗報告,樣本返還

 

  質量保證:客觀、公正、可信數據結果

 

  交付時間:大約5-10個工作日(根據預實驗、樣本數量情況決定)

 

  服務項目: miRNA RT qPCR檢測(莖環法)

 

  miRNA qPCR引物引物設計、合成、含驗證

 

  1、相對定量:以U6等為內參,檢測樣本中相關miRNA的表達量。

 

  2、絕對定量:以化學合成的miRNA成熟鏈為標準品,做5個梯度點以上的稀釋后制作定量標準曲線,通過標準曲線對待檢測miRNA進行絕對定量。

 

  服務流程1、 依據客戶要求用莖環法設計合成引物(含驗證)

 

  2、 標準品制備:只針對于絕對定量,相對定量多種內參可供選擇(如:U6,mir-16)

 

  3、 RNA提取及RNA質量分析:采用Invitrogen的TRIzol 進行裂解提取,RNA提取質量有瓊脂糖凝膠電泳及分光光度計雙重質控

 

  4、 逆轉錄:嚴格按照fermentas的反轉錄試劑盒要求抽取質控合格的RNA,并且采用基因特異性引物進行反轉錄

 

  5、 預實驗驗證樣品和引物:依據客戶選定內參及基因,對客戶全部樣本內參及個別樣本基因進行驗證,以確保樣本的反轉錄情況及基因的設計

 

  6、 正式實驗:在以上所有質控合格的情況下,每個樣本每個基因進行四個復孔的重復檢測,確保至少提供三個復孔Ct≤0.5的數據

 

  7、 實驗報告:提供詳細的實驗報告,包括RNA提取電泳圖、擴增曲線、溶解曲線及數據結果分析

 

  樣本要求細胞(≥106個):必須是活細胞,貼壁或懸浮均可

 

  組織(≥50mg):盡量新鮮并且切取之后立即置于液氮或-80℃保存

 

  石蠟切片(≥10張):厚度10-20μm,石蠟組織塊或固定組織均可

 

  全血(2ml以上):抗凝管4℃運輸,短期保存,分離后血清亦可

 

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